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熒光定量PCR儀操作與維護簡(jiǎn)述
點(diǎn)擊次數：1070 更新時(shí)間：2020-01-15
     簡(jiǎn)單的說(shuō)，熒光定量PCR儀就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專(zhuān)一性的連鎖復制。
 
    目前，常用的技術(shù)，可以將一段基因復制為原來(lái)的一百億一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類(lèi)。
 
    熒光定量PCR儀實(shí)驗操作注意事項：
 
    盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽(yáng)性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進(jìn)行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節都應該注意：
 
    1、戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套；
 
    2、使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長(cháng)時(shí)間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；
 
    3、避免反應液飛濺，打開(kāi)反應管時(shí)為避免此種情況，開(kāi)蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
 
    4、操作多份樣品時(shí)，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的度；
 
    5、加入反應模板，加入后蓋緊反應管；
 
    6、熒光定量PCR儀操作時(shí)設立陰陽(yáng)性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴增系統的可信性；
 
    7、盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染，使用可替換或高壓處理的加樣器。
 
    如沒(méi)有這種特殊的加樣器，少PCR操作過(guò)程中加樣器應該，不能交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區；
 
    8、熒光定量PCR儀重復實(shí)驗，驗證結果，慎下結論。