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　　1、ABI7500熒光定量PCR儀目的條帶很亮，但是邊沿不清楚，前后有拖尾現象。出現這樣的問(wèn)題，則需要進(jìn)行細致的分析，因為引起該問(wèn)題的可能很多。

　　2、可先檢查是否模板質(zhì)量問(wèn)題，如有降解等，模板應避免反復凍融。也有可能是抽提RNA時(shí)有污染，則需要重新抽提RNA。

　　3、此外，也可能是非特異性擴增引發(fā)該問(wèn)題，可提高退火溫度，少循環(huán)次數。電泳緩沖液時(shí)間太長(cháng)，ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時(shí)電壓太高、電泳液過(guò)久沒(méi)換，電泳膠臟了等都可能引發(fā)該問(wèn)題。

　　4、如果不是由上述原因引起，則進(jìn)一步檢查加樣量是否過(guò)大，制膠過(guò)程中膠孔是否制好，EB是否沖洗干凈、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴增的條件不合適。針對具體原因再采取相應的措施。

　　5、PCR產(chǎn)物何時(shí)需要用凝膠純化，何時(shí)不需要？當凝膠分析擴增產(chǎn)物只有一條帶時(shí)，則不需要使用凝膠純化。當可見(jiàn)其他雜帶時(shí)，則可能是積累了大量引物的二聚體，在克隆前需要做凝膠純化。

　　6、如果實(shí)驗中沒(méi)有回收到目的片段，則需要繼續進(jìn)行對照實(shí)驗。包括涂布未轉化的感受態(tài)細胞、轉化完整質(zhì)粒，計算菌落生長(cháng)數，測定轉化效率、用標準載體，連接對照，轉化高頻率感受態(tài)細胞，按照的實(shí)驗步驟進(jìn)行。

　　7、實(shí)驗中出現假陽(yáng)性擴增該怎么辦？這是擴增系統受到污染的表現，應通過(guò)檢查排除污染源。先考慮是否為試劑污染，可將試劑分裝好直接置于PCR儀中擴增進(jìn)行判斷。

　　8、其次要考慮是否為實(shí)驗室污染，可更換所用的移液器、吸咀管（離心管）等，將試驗中的關(guān)鍵步驟轉移到一個(gè)新的環(huán)境中，判斷是否為實(shí)驗室污染。

　　9、如果是則需要對整個(gè)實(shí)驗室及實(shí)驗器材*清洗處理，保持良好的通風(fēng)、清潔等。此外，還要考慮是否為采樣污染，一般表現為一批結果陽(yáng)性率很高，一批結果陽(yáng)性率又下降很多，如此反復。解決方法為盡量使用一次試管及吸咀取樣。

　　總結：ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項小編就分享到這了，看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧！總的來(lái)說(shuō)，希望對大家有所幫助。